（知识点）化学实验基本知识：蛋白质的两性解离

2、原理：蛋白质是两性电解质，蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液pH值的影响。 当溶液的pH值达到一定值时，蛋白质颗粒上的正负电荷数量相等。 在电场中，蛋白质既不向阴极也不向阳极移动。 此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。 观点。 不同的蛋白质有不同的等电点。 在等电点，蛋白质的物理和化学性质发生变化。 这些性质的变化可用于确定各种蛋白质的等电点。

3. 材料与试剂

0.4%酪蛋白乙酸钠溶液200ml（取0.8g酪蛋白沉淀法，加少量水在研钵中仔细研磨，将得到的蛋白悬浮液移入200ml锥形瓶中，用少量温水洗涤牛奶40-50℃水然后将洗涤液转移至锥形瓶中，将乙酸钠溶液置于50℃水浴中，小心旋转锥形瓶直至锥形瓶中的溶液完全溶解。全部转移至200ml容量瓶中，加水至刻度，定容至1.00M乙酸溶液100ml；

4. 仪器

水浴锅、温度计、200ml锥形瓶、100ml容量瓶、吸管（1ml、10ml）、试管、试管架、研钵

5. 操作

(1)取4支相同规格的试管，按下表顺序准确加入各试剂

试管数量

蒸馏水（毫升）

0.01M 乙酸（毫升）

0.1M 乙酸（毫升）

1.0M 乙酸（毫升）

8.4

0.6

-

-

8.7

-

0.3

-

8.0

-

1.0

-

7.4

-

-

1.6

(2)在上述各试管中加入1ml酪蛋白乙酸钠溶液，加入一管，摇匀一管。 此时，1、2、3、4管的pH值分别为5.9、5.3、4.7、3.5。 观察其浑浊度。 静置10分钟后，观察浑浊度。 最浑浊管的pH值就是酪蛋白的等电点。

2. 蛋白质的沉淀和变性

1、目的：加深对蛋白胶体溶液稳定因素的认识； 了解几种沉淀蛋白质的方法及其实际意义； 了解蛋白质平坦度与沉淀之间的关系。

2、原理：水溶液中的蛋白质分子因表面形成水化层和双电离层而成为稳定的亲水性胶体颗粒。 在某些物理和化学因素的影响下，蛋白质颗粒会因失去电荷和脱水而沉淀。

蛋白质沉淀反应可分为两类：

(1)可逆沉淀反应：如蛋白质盐析，用乙醇(或丙酮)在低温下短时间作用于蛋白质。 常用于纯化蛋白质。 （蛋白质分子的结构尚未发生明显变化）；

(2)不可逆沉淀反应：如加热或与重金属或有机酸反应引起的蛋白质沉淀、凝固(蛋白质分子内部结构发生显着变化)。 蛋白质变性后，有时维持溶液稳定性的条件仍然存在（如电荷），不会沉淀。 因此，变性的蛋白质不一定会出现沉淀，并且沉淀的蛋白质不一定都出现变性。

3. 材料与试剂

蛋白溶液500ml（5%蛋清蛋白溶液或蛋清水溶液新鲜鸡蛋蛋清：水=1:9）PH4.7醋酸-乙酸钠缓冲溶液100ml； 3%硝酸银溶液10ml； 5%三氯乙酸溶液50ml； 95%乙醇250ml； 250ml饱和硫酸铵溶液； 硫酸铵晶体粉末1000g； 0.1M盐酸溶液300ml； 100ml 0.1M氢氧化钠溶液； 100ml 0.05M碳酸钠溶液； 100ml 0.1M醋酸溶液； 甲基红溶液20ml； 150ml 2%氯化钡溶液。

4. 操作

(1)蛋白质的盐析：无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液可使蛋白质沉淀。 不同浓度的盐导致不同的蛋白质沉淀。 将5%卵清蛋白溶液5ml加入试管中，再加入饱和硫酸铵溶液2ml，混匀，静置几分钟，使球蛋白沉淀。 倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解。 为什么？ 过滤管中的内容物并向管中添加硫酸铵粉末直至其不再溶解。 此时析出的沉淀物为白蛋白。 取出部分白蛋白，加入少量蒸馏水，观察沉淀重新溶解。

(2)重金属离子沉淀蛋白质：重金属离子与蛋白质结合形成不溶于水的复合物。 取试管，加入2ml蛋白溶液，加入1-2滴3%硝酸银溶液，摇动试管，出现沉淀。 静置一段时间，倒掉上清液，向沉淀物中加少量水，观察现象并说明原因。

(3)某些有机酸沉淀蛋白质：取试管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，摇动试管，观察沉淀的形成。 静置一段时间，倒出上清液，加水沉淀，观察现象，并说明原因。

(4)有机溶剂沉淀蛋白质：取试管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇。 充分混合并观察现象。 加水并观察并解释原因。

(5)乙醇引起的变性、沉淀：取3支试管，编号。 按下列顺序添加试剂：

5%蛋清蛋白溶液

0.1M氢氧化钠

0.1M盐酸

95%乙醇

PH4.7缓冲液

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摇匀后，观察各管的变化。 静置片刻，向每管中加入8ml水，然后向2管和3管中加入一滴甲基红，分别用0.1M乙酸溶液和0.05M碳酸钠溶液中和。 观察各管的颜色变化和沉淀的形成。 向每管中加入几滴0.1M盐酸溶液，观察沉淀的重新溶解。 解释原因。