百泰派克生物科技提供一站式蛋白质凝胶服务相关解决方案

一维 SDS-PAGE 服务

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 是分离大分子（包括 DNA、RNA 和蛋白质）最常用的技术之一。 电泳过程是通过施加电场使带电离子迁移的过程。 在该技术中，带电分子的迁移率与其净电荷和其通过的溶液的电阻成正比。 十二烷基硫酸钠 (SDS) 是一种阴离子洗涤剂，其分子在溶解过程中在很宽的 pH 范围内都带有净负电荷。 多肽链与其相对分子质量成比例地结合一定量的SDS，SDS上的负电荷破坏了蛋白质的大部分复杂结构。

一维SDS-PAGE

将蛋白质混合物添加到凝胶加样空间后，可能会发生在最大的蛋白质迁移到凝胶之前最小的蛋白质已经从凝胶中跑出的情况。 因此，为了获得更好的分离效果，可以利用凝胶的特性，将凝胶分为两层：堆积胶和分离胶来解决这个问题。 PAGE 凝胶的底部是较大的分离胶，顶部是较窄的堆积胶。 电泳缓冲液由甘氨酸制成，pH为8.3，浓缩胶的pH为6.8，分离胶的pH为8.8。 在电泳过程中，电流由沿一个方向迁移的带负电的分子携带。 由于在 pH 8.3 时只有约 10% 的甘氨酸分子带负电，因此此处的电流主要由堆积缓冲液中的 Cl- 离子携带，这些离子在蛋白质之前朝堆积凝胶的底部堆积。 结果，被 SDS 包裹的蛋白质分子夹在上面的甘氨酸分子和下面的 Cl- 之间，并浓缩成比最初加载体积小得多的条带。

当电流流动时，蛋白质迁移到分离凝胶中。 此时，pH为8.8的分离胶缓冲液中的甘氨酸变成带负电的分子，可以非常迅速地迁移，几乎与Cl-离子一致，而蛋白质紧随其后。 此时，蛋白质通过Cl-和甘氨酸阴离子的运动进入分离凝胶并携带电流。 蛋白质变成棒状、带负电的大分子，具有类似流体动力学的特性，其迁移率仅取决于其分子质量。

SDS-PAGE广泛应用于蛋白质组学分析，包括蛋白质分子量测定、蛋白质鉴定、样品纯度分析、二硫键鉴定、蛋白质定量等。

等电聚焦 IEF 分析服务

等电聚焦 (IEF) 是一种根据等电点 (pI) 分离蛋白质的电泳技术。 当pI=PH时，蛋白质的净电荷为0，因此蛋白质在电场中不会迁移。 在 IEF 中，蛋白质的分离是在含有两性电解质混合物的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中进行的硫酸钠的相对分子质量，两性电解质在电场中迁移并在凝胶中形成 pH 梯度。 蛋白质分子浓缩在具有pH梯度的介质中，通过介质的电流会产生带正电的氧化极和带负电的还原极。 带电的蛋白质分子将向带有相反电荷的极移动。 带电分子在凝胶中的运动直到周围的pH值与其等电点相同，即蛋白质的净电荷为0时才停止。

因此，具有相同等电点的蛋白质集中在 pH 固定带中。 每个蛋白质都位于 pH 梯度中与其 pI 相对应的位置。 IEF技术具有极高的分辨率，即使只有一种带有不同电荷的蛋白质，也会被分成不同的条带。

等电聚焦 IEF 分析

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